2×SYBR Green qPCR Mix(预混ROX1)
发布时间: 2018-11-18 16:25:29
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产品名称 |
品牌 |
货号 |
规格 |
目录价 |
2×SYBR Green qPCR Mix
(ROX独立包装) |
EZBioscience |
A0001 |
5 ml |
1000 |
2×SYBR Green qPCR Mix
(预混ROX1) |
EZBioscience |
A0001-R1 |
5 ml |
1000 |
2×SYBR Green qPCR Mix
(预混ROX2) |
EZBioscience |
A0001-R2 |
5 ml |
1000 |
2×SYBR Green Color qPCR Mix(彩色qPCR试剂盒) |
EZBioscience |
A0012 |
5 ml |
1200 |
2×SYBR Green qPCR Master Mix ( ROX1 plus)
Cat. No.: A0001-R1
一、试剂盒简介
本试剂盒采用了具有超强扩增能力和抗干扰能力的热启动DNA聚合酶,结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统,使之具备了更强的扩增效率、抗干扰能力,更高的灵敏度和特异性。具有起峰更早,在相同情况下得到的荧光信号更强,Ct值更小,熔解曲线特异性更高等特点。此外,为了进一步简化操作,该试剂盒的2× SYBR Green qPCR mix预混了ROX1染料(high Rox),从而只需要将模板cDNA、引物以及 ddH2O添加进去,即可进行qPCR反应。
二、产品组分
Components |
A0001-R1 (500Rxns) |
2× SYBR Green qPCR Master Mix*1 |
5 ml |
*1:包含Hot-start DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+,和Buffer,同时预混了ROX1, 用于校正不同孔之间产生的荧光信号误差。
三、试剂保存条件
本试剂建议置于-20℃避光保存。
四、适用的仪器型号(如果仪器不在下表中,请用A0001-R2或A0001):
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne™, StepOne Plus™ |
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Cepheid SmartCycler®; Roche LightCyclerTM 480; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler. |
五、关于qPCR反应是否良好的判断:
1、如果扩增曲线呈典型的S型曲线,背景荧光信号阶段、荧光指数扩增阶段及平台期均完整可见,熔解曲线单峰,内参Ct值在合理范围内(通常可在13 ~ 22之间,典型的内参Ct值在15 ~ 20之间),则可认为该反应正常;
2、如果同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内;
同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。
六、常见的注意事项、操作要点及优化方法:
1、实验开始前首先验证引物是否适用,标准与上述标准类似,主要观察扩增曲线与熔解曲线;
2、引物验证后应该分装为几份,防止污染或降解;
3、RNA的质量及cDNA的质量对qPCR的结果具有很大的影响,应尽量保证RNA不降解,通常建议RNA提取后尽快进行逆转录,避免反复冻融,或者多次逆转录。如果预计使用量较大,则可以一次多逆转几管cDNA。如果条件允许,cDNA建议优先保存在-80℃冰箱
七、关于qPCR引物的设计:
1、首先可以查询Google Scholar中的文献当中的引物,通常中等及以上水平期刊中的qPCR引物绝大多数可以直接使用;
2、NCBI数据库的Blast数据库中的primer blast提供了针对序列或者Gene ID的qPCR引物设计方案,可以每个基因设计2对引物,并进行合成、验证;
3、Primer Bank数据库中有部分已经验证过的引物可用,也可作为参考。
备注:PDF版英文说明书请在“技术资料”---“说明书下载”栏目中下载。